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細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒實驗的準(zhǔn)備和反應(yīng)步驟

點擊次數(shù):890次 更新時間:2020-09-17

  細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒實驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。
  細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒的準(zhǔn)備:
  1、使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫,試劑不能直接在37oC溶解。
  2、標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,依次倍比稀釋成不同的梯度,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
  3、濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
  細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒反應(yīng)步驟:
  (1)嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。
  (2)加樣后及時放人孵箱。標(biāo)本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
  (3)封板溫育時,各孔一定要封嚴(yán),防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。
  (4)用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,ELISA試劑盒這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。
  (5)合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
  (6)加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
  (7)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
  (8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
  (9)應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔,整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至低限度。ELISA試劑盒豚鼠從而提高檢測的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實驗結(jié)果。
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